血球計(jì)數(shù)板是實(shí)驗(yàn)室“最老"也是可靠的細(xì)胞計(jì)數(shù)工具。但許多實(shí)驗(yàn)員在使用時(shí)，要么公式記錯(cuò)，要么搞不清邊緣細(xì)胞該不該數(shù)。下面從加樣、數(shù)格到公式一次講清楚。

第一步：加樣關(guān)鍵技法
清潔計(jì)數(shù)板和蓋玻片（酒精擦拭），壓緊蓋玻片后應(yīng)看到“牛頓環(huán)"（彩色干涉條紋），說明密封良好。
用微量移液器吸取10-15μL臺(tái)盼藍(lán)染色的細(xì)胞懸液，從蓋玻片邊緣一次注入，利用虹吸作用自然充滿計(jì)數(shù)室。不要產(chǎn)生氣泡，也不要溢出。

第二步：選哪些格子來數(shù)？
在10×物鏡下，選擇四角的大方格（每個(gè)大方格面積1mm2，深度0.1mm，體積0.1μL）。
若細(xì)胞密度極低，可數(shù)全部9個(gè)大方格；若密度極-高，可只數(shù)中央大方格中的5個(gè)中格（但常用的是四角計(jì)數(shù)）。

第三步：邊緣細(xì)胞取舍規(guī)則
遵循“計(jì)上不計(jì)下，計(jì)左不計(jì)右"——只計(jì)數(shù)落在方格上邊線和左邊線上的細(xì)胞，不計(jì)落在下邊線和右邊線上的細(xì)胞。這樣可以避免相鄰方格重復(fù)計(jì)數(shù)。

第四步：代入公式計(jì)算細(xì)胞濃度
標(biāo)準(zhǔn)公式：
細(xì)胞濃度（cells/mL）＝（四個(gè)大方格總細(xì)胞數(shù) ÷ 4）× 稀釋倍數(shù) × 10?

簡化速算法（記憶友好）
記四個(gè)大方格總活細(xì)胞數(shù)為 N，臺(tái)盼藍(lán)稀釋倍數(shù)為 D（通常為2，因?yàn)?/span>1:1混合），則：
濃度（cells/mL） = N × D × 2500

舉例：N＝200，D＝2 → 200 × 2 × 2500 = 1,000,000 cells/mL。

第五步：遇到成團(tuán)細(xì)胞怎么辦？
如果視野中細(xì)胞團(tuán)塊占比超過10%，說明懸液吹打不充分，應(yīng)重新制備。計(jì)數(shù)時(shí)只統(tǒng)計(jì)分散的單細(xì)胞，團(tuán)塊不能按1個(gè)細(xì)胞記錄，否則準(zhǔn)確度嚴(yán)重下降。

注意：手動(dòng)計(jì)數(shù)的誤差通常來自操作不一致。建議同一批樣品由同一人重復(fù)計(jì)數(shù)2次，取平均值，并將公式寫進(jìn)實(shí)驗(yàn)室SOP中。

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