PEI轉(zhuǎn)染試劑是一種基于聚乙烯亞胺的陽離子聚合物轉(zhuǎn)染工具,通過靜電作用與帶負電的核酸結(jié)合形成復合物,促進細胞攝取并實現(xiàn)基因表達。
相比脂質(zhì)體等其他轉(zhuǎn)染試劑,PEI轉(zhuǎn)染試劑原料成本低,且部分產(chǎn)品用量少,多數(shù)產(chǎn)品可在含血清的培養(yǎng)基中使用,轉(zhuǎn)染前后無需更換培養(yǎng)基;且能提供可重復的轉(zhuǎn)染結(jié)果。
操作要點:
細胞狀態(tài):確保細胞處于對數(shù)生長期,融合度達70%-80%。
試劑比例:DNA與PEI的比例需優(yōu)化,不同細胞系需預實驗確定配比。
復合物制備:將稀釋后的PEI與核酸在無血清培養(yǎng)基中混合,靜置15-30分鐘。
轉(zhuǎn)染處理:將復合物逐滴加入細胞培養(yǎng)基,輕柔混勻后繼續(xù)培養(yǎng)。
結(jié)果檢測:通常在24-72小時后通過熒光顯微鏡、Western Blot或qPCR評估轉(zhuǎn)染效率。
毒性控制:對于敏感細胞,可在轉(zhuǎn)染4-6小時后更換新鮮培養(yǎng)基以減少毒性;降低PEI/DNA比例或復合物孵育時間也可減輕細胞損傷。
適用范圍廣:既能轉(zhuǎn)染 HEK293等常見細胞系,也可用于部分原代細胞轉(zhuǎn)染;同時可適配 DNA、RNA、寡聚核酸等多種核酸分子,還特別適合多質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染,常用于重組病毒載體(AAV、LV 等)生產(chǎn)和重組蛋白瞬時表達。